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提起細胞培養(yang) ，相信很多老師都遇到過培養(yang) 液中的“小黑點"，因無法確定它的身份而頭痛不已。本期細胞學堂將為(wei) 大家揭秘這些黑點究竟是什麽(me) ，幫助您快速上手開展實驗。
01
血清沉澱
血清在融解過程中會(hui) 產(chan) 生大量的析出物，呈現出小顆粒樣的東(dong) 西，甚至呈纖維樣，這是由於(yu) 血清融解後導致的蛋白、鹽類物質的析出。
血清融解時混勻 血清靜置融解不混勻，出現黑點
顯微鏡下的血清沉澱物
影響因素
通常血清析出物的多少與(yu) 融解方法有關(guan) 。通過4℃冰箱解凍和溶解過程持續搖晃混勻，可以有效避免沉澱產(chan) 生，而37℃靜置混勻則會(hui) 有較多沉澱物析出。
處理方法
血清沉澱產(chan) 生後應離心去除部分沉澱，否則在培養(yang) 細胞時會(hui) 看到較多黑點和雜質類物質，影響判斷。
02
細胞碎片或者分泌物
在細胞代謝過程中，細胞凋亡後會(hui) 產(chan) 生一些分泌物的沉積和碎片物質，在顯微鏡下呈黑點狀。
顯微鏡下的細胞碎片及分泌物
特征
①
細胞碎片大小不均一，會(hui) 隨著培養(yang) 時間少量增多，但是不會(hui) 呈倍增的趨勢增多；
②
細胞狀態差時碎片會(hui) 較多，狀態變好後黑點減少；
③
細胞分泌物情況根據細胞有區別，有的細胞不產(chan) 生分泌物，有的細胞會(hui) 有較多的分泌物，往往是不影響細胞形態和增殖速度。
03
外源微生物汙染
當細胞被支原體(ti) 、黑膠蟲或者細菌汙染時，往往也會(hui) 產(chan) 生很多小黑點，尤其是細菌汙染的情況出現時，這些小黑點甚至會(hui) 導致培養(yang) 液渾濁。
細胞支原體(ti) 汙染，黑點較多
細胞加入支原體(ti) 清除試劑第二天，黑點顯著變少
如何區分是否為(wei) 汙染？
1
外源微生物汙染
支原體(ti) 和黑膠蟲汙染一般表現為(wei) 黑點增多並伴隨細胞生長速度變慢、死細胞增多等現象，通常加入對應清除試劑後細胞狀態會(hui) 有顯著改善。
2
細胞分泌物/細胞碎片
細胞分泌物和細胞碎片則不會(hui) 因為(wei) 加入清除試劑後而改善，會(hui) 持續存在且不影響細胞增長。
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